感受态细胞制备原理与举例

一、感受态细胞

即受体细胞通过理化方法处理，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态的细胞。

二、感受态细胞制备原理

将快速生长的大肠杆菌置于经低温0℃预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀（渗透作用），同时，Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞。

大肠杆菌DH5α感受态细胞

三、大肠杆菌DH5α感受态制备实验步骤

实验步骤一

从-80℃冰箱中取出保种的DH5α菌株，用灭菌的枪头吸取少量保菌液加入至合适的LB液体培养基中，在LB固体培养基进行涂板处理，置于37℃培养箱中过夜培养。

实验步骤二

次日，从LB固体培养基上挑取湿润，圆滑的大肠杆菌单菌落，接种于无抗生素的5ml LB液体培养基中，37℃下振荡培养过夜，至对数生长后期。将该菌悬液以1:100～1:50的比例接种于100ml LB液体培养基中，37℃振荡培养2-3h至OD600＝0.3-0.5左右。（注：此步必要时可在显微镜下镜检菌细胞是否形态一致，有无杂菌污染。）

实验步骤三

在无菌条件下将菌液转移到冰上预冷的离心管中，冰上放置10-30min，使培养物冷却至0℃，然后4℃，4000rpm/min离心10min；

实验步骤四

弃掉上清，倒置1 min，以便将培养液流尽；

实验步骤五

用冰预冷的0.1 mol/L的CaCl2溶液10 ml轻轻悬浮细胞，充分混匀，冰上放置30 min后，4℃下4000rpm/min离心10min；

实验步骤六

弃掉上清，并倒置1 min，以便最后的培养液流尽；

实验步骤七

加入4 ml预冷含15%甘油（已灭菌处理）的0.1 mol/L的CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置几分钟，即成感受态细胞悬液；

实验步骤八

感受态细胞100 μL分装，标记贴标签，贮存于-80 ℃保存备用。

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