RAW 264.7细胞复苏

要复苏RAW264.7巨噬细胞，首先需要将含有1 mL细胞悬液的冻存管从液氮中取出并快速解冻于37℃水浴中，然后将其转移到1 mL新鲜培养基的无菌管中，并ce底混合均匀。

接下来，使用1000 rpm的离心速度离心5分钟，将上清液倒掉，随后再加入1 mL培养基并充分重悬细胞。

将悬液加入含有适量培养基的培养皿或瓶中（10ml/10 cm皿），并将其放置在培养箱中过夜培养（37℃，5% CO2）。第二天检查细胞的生长状态和密度，以确定是否需要进行传代操作。通过这些步骤，可以有效地复苏RAW264.7巨噬细胞，并为其后续培养提供良好的基础。

RAW 264.7细胞的详细复苏具体步骤一

【准备工作】

水浴锅：预热至37℃。

培养基：提前复温至室温或37℃。

离心机：设置好转速（通常为1000 rpm）。

RAW 264.7细胞的详细复苏具体步骤二

【解冻细胞】

取出细胞：从液氮罐中取出冻存管，观察管内无液氮的情况下，捏住管盖。

水浴解冻：将冻存管迅速浸入37℃的水浴锅中，轻轻摇晃，直到细胞融化至米粒大小的冰块时终止水浴，整个过程不超过2分钟。

RAW 264.7细胞的详细复苏具体步骤三

【离心和重悬】

离心：将解冻后的细胞悬液转移至离心管，以1000 rpm离心3分钟，弃去上清液。

重悬：加入预热的培养基，轻柔重悬细胞。

RAW 264.7细胞的详细复苏具体步骤四

【接种和培养】

接种：将重悬后的细胞悬液接种到新的培养瓶中，轻轻混匀。

培养：将培养瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

观察：复苏24小时后，观察细胞的贴壁情况，确保细胞健康生长。

【注意事项】

快速操作：整个复苏过程应尽可能在5-10分钟内完成，以确保细胞的高存活率。

防护措施：在水浴解冻时，使用一次性PE手套包住冻存管，避免直接接触水源，防止污染。

细胞状态：定期观察细胞形态，确保细胞处于健康状态。

通过以上步骤，研究人员可以有效地复苏RAW 264.7细胞，确保其在后续实验中的良好状态。

培养基：中科百抗RPMI1640，DMEM培养基

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