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同型对照抗体是什么?如何使用?

 更新时间:2024-10-17    点击量:372

一、什么是同型对照抗体?


同型对照抗体是一种与检测抗体(一抗)相同种属、相同种型(和亚类)、具有相同标记物的但对目标抗原无特异性识别能力的一抗。

检测抗体同型对照抗体唯1的区别在于对待测样本中目标抗原的特异性识别能力。检测抗体能在代测样本中特异性识别并结合目标抗原,而同型对照抗体不会特异性结合任何存在待测样本中的抗原,其他属性二者是完权一致的。

二、为什么需要同型对照抗体?

在流式细胞术(FC)和免疫组织化学(IHC)等实验中,有很高的背景染色风险,我们会发现抗体与细胞的结合,可以通过不止抗体-抗原特异性结合这一种方式。

比如 B细胞、巨噬细胞、单核细胞和树突状细胞等细胞表面会表达Fc受体,它能够非特异性结合抗体Fc端,将抗体标记在非目标细胞上;还有一些脂质和碳水化合物等,他们也可以通过非特异的方式与抗体结合。这些非特异性结合对于我们的实验而言,就是一种干扰信号,造成实验结果的不准确甚至错误。

因此,为了评估非特异性背景信号对染色结果的贡献并区分非特异性和特异性抗体染色,同型对照是非常有必要的。

三、如何选择和使用同型对照抗体?

在选择上,同型对照抗体必须与所使用的检测抗体(一抗)的相匹配,须来源于相同物种,具有相同种型和Ig亚类,并具有相同标记物。比如,如果你使用PE标记的兔重组单克隆抗体,那你应该使用PE偶联的兔IgG同型对照抗体作为对照。

在使用上,同型对照组用同型对照抗体代替一抗,其他实验条件与实验组均相同,包括:工作浓度(μg/ml)、温度、孵育和检测方法。

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