细胞漂浮也有可能是你操作不当！

细胞如若在生长过程中遇到漂浮困境，你有没有想过会是操作不当？！接下来，跟随康康一起，探讨这个非微生物原因导致的细胞培养问题，并找到让它正常发展的解决方案。

复苏后细胞漂浮原因一：细胞本身贴壁能力较弱

比如细胞转染的明星细胞293T，它生长较快，但贴壁能力弱，容易出现明显的成片脱落现象。

293细胞

∝解决办法：提前使用明胶包被板子，增强吸附性。另外，还建议使用TC处理（tissue culture treated）的培养瓶/皿促进细胞贴壁附着。

复苏后细胞漂浮原因二：培养基选择错误

比如293T细胞培养，推荐使用的培养基为DMEM（高糖）+10%FBS，但是如果使用RPMI-1640+10%FBS做为培养基，培养液糖分不足，故不够支持细胞生长所需。虽然用错了培养基，但这不代表细胞一定不能生长。但如果培养细胞中长时间使用不正确的培养基，甚至缺少必要营养组分（例如优质的血清），那细胞真的就漂了。

∝解决办法：参照细胞使用说明书或者实验室预实验结果，使用合适的培养体系。对于间充质干细胞这类生存条件苛刻的细胞，培养基和血清的质量要求会更高。

复苏后细胞漂浮原因三：复苏过程中操作不当

复苏过程水温太低，解冻时间不足，冰晶损伤了细胞；水温太高，烫伤了细胞。

∝解决办法：复苏细胞过程，一般是从液氮罐中取出冻存管，立即放入到37℃水槽中快速解冻，摇晃冻存管，确保在1分钟内完成解冻。

复苏后细胞漂浮原因四：离心对细胞造成损伤

去除冻存液中残留的DMSO过程，在细胞复苏过程中，解冻完毕之后，为了防止残留DMSO对细胞的毒性影响，很多小伙伴会将细胞悬液转入到15mL离心管内，离心去上清，再重悬细胞接种培养。但这种情况，会导致刚复苏还极为脆弱的细胞，因为离心机的离心力更为脆弱甚至破损死亡。

∝解决办法：

其实除了少数对DMSO敏感的细胞之外（例如DMSO诱导HL-60分化成类中性粒细胞），绝大多数细胞应在解冻之后，直接接种在培养皿内，隔天再更换新鲜培养基去除DMSO。

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