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022-66387942IHC未染色或无信号的原因:
一、抗体问题:
抗体与一抗或二抗不兼容、抗体浓度不合适、抗体失效或储存不当等都会导致无染色。例如,使用抗一抗种属来源的二抗,确认二抗是否识别一抗的亚型;使用更高浓度的抗体或延长孵育时间;设置阳性对照,确保抗体仍然有效。
二、抗原修复不足:
固定步骤可能会改变抗体识别的抗原表位,导致抗原修复不足。使用微波或压力锅进行抗原修复,确保使用新鲜配置的修复液。
三、样本处理不当:
样本存放时间过长、切片制备不当(如脱蜡不ce底)、组织切片干片等都会影响染色效果。建议使用新鲜制备的切片,并确保在实验过程中保持切片湿润。
四、实验操作问题:孵育时间不足、封闭不充分、抗体稀释比例不当等操作问题也会导致无染色。严格按照验证过的实验步骤进行操作,确保每个步骤都正确执行。
五、试剂问题:
试剂过期、试剂保存不当或试剂质量不佳都会影响染色效果。使用前检查试剂的有效期和保存条件,确保试剂质量。
六、透化:
抗体和缓冲液在组织切片中的透化不足。建议在缓冲液中使用0.5%~1%Triton。
解决IHC未染色或无信号的建议:
1.确认抗体兼容性:使用与一抗种属匹配的二抗,确认二抗是否识别一抗的亚型。
2.优化抗原修复:使用微波或压力锅进行抗原修复,确保使用新鲜配置的修复液。
3.正确处理样本:使用新鲜制备的切片,确保在实验过程中保持切片湿润,避免干片。
4.严格操作步骤:严格按照验证过的实验步骤进行操作,确保每个步骤都正确执行。
5.检查试剂质量:使用前检查试剂的有效期和保存条件,确保试剂质量。
通过以上方法,可以有效解决IHC实验中未染色或无信号的问题,提高实验的成功率和准确性。
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