Toxin肠毒素的用途——作为超抗原

原理：葡萄球菌肠毒素属于超抗原，能够非特异性激活T细胞增殖并释放过量细胞因子，可用于抗肿瘤治疗。T细胞活化通过暴露于特定抗原（例如葡萄球菌肠毒素 B (SEB)）来测定。SEB是一种细菌毒素，能够与抗原呈递细胞 (APC) 和 TCR上的MHCII类分子结合，诱导促炎细胞因子的释放，例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。

应用举例：诱导活化T细胞

一、将 PBMCs（120 K/孔）与 Nuclight 绿色试剂标记的 Ramos 细胞（40 /孔）进行共培养。使用 CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE 抗体或葡萄球菌肠毒素 B (SEB) 诱导活化。在 60 h 时，使用 T 细胞活化分析试剂盒、T 细胞介导的细胞杀伤分析试剂盒和 T 细胞耗竭分析试剂盒联合 iQue® 3 系统分析 10 µL 样本。

每种活化因子会导致不同的 CD3+ T 细胞蛋白表达和杀伤特征：

1.CD3/CD28 Dynabead 诱导的 T 细胞活化呈现浓度依赖的特性。最高的微球数量对应于最大的活化标志物表达百分比。该结果与高水平的细胞耗竭标志物呈现相关性。

2.与 Dynabead 和 SEB 相比，CD3×CD19 BiTE 抗体介导的靶细胞死亡增量最多，活化和耗竭水平显著降低。这说明 BiTE 介导的免疫细胞杀伤时间可能持续的较长。

3.SEB 刺激，即使在zui低浓度下，也可使 T 细胞活化并产生最大杀伤率，导致高水平的 T 细胞耗竭。

原理：葡萄球菌肠毒素属于超抗原，能够非特异性激活T细胞增殖并释放过量细胞因子，可用于抗肿瘤治疗。T细胞活化通过暴露于特定抗原（例如葡萄球菌肠毒素 B (SEB)）来测定。SEB是一种细菌毒素，能够与抗原呈递细胞 (APC) 和 TCR上的MHCII类分子结合，诱导促炎细胞因子的释放，例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。

二、使用来自 T 细胞活化分析试剂盒、T 细胞介导的细胞杀伤分析试剂盒和 T 细胞耗竭分析试剂盒的 Qbeads 测定 Nuclight 绿色标记的 Ramos 和 PBMC（3:1 比例）共培养时细胞因子的释放数据。在多个试剂盒中均检测了 IFNɣ 和 TNFa 的浓度，以便将所有试剂盒的测定结果取平均值。

各个活化因子对细胞因子分泌和对表面蛋白表达的影响相当：

1.在使用的微球数量范围内，CD3/CD28 Dynabead 诱导的细胞因子释放呈浓度依赖性增加。

2.与微球或 SEB 相比，CD3×CD19 BiTE 刺激后的细胞因子释放始终较低（最高刺激浓度下的颗粒酶 B 浓度除外）。该结果表明，在降低毒性风险的情况下（例如细胞因子释放综合征），可以实现高水平的细胞杀伤。

3.SEB 可诱导高水平的细胞因子释放（即使在低浓度下）。

三、将 PBMCs（25 K/孔）与贴壁 AU565 细胞（5 K/孔）进行共培养。使用 SEB 诱导 T 细胞活化。在 60 h 时，使用 T 细胞活化分析试剂盒、T 细胞介导的细胞杀伤和 T 细胞耗竭分析试剂盒联合 iQue® 3 系统提取靶细胞和效应细胞，进行终点分析。

SEB 活化诱导靶细胞杀伤呈浓度依赖性增加，伴随 CD3+ T 细胞上活化（CD69、CD25 和 HLA-DR）和耗竭（PD-1、LAG-3 和 TIM-3）标志物的高表达（在所有使用的 SEB 浓度中均是如此）。

其他应用：抗体制备、毒素检验、多种免疫和偶联试验、药物研发等。

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