欢迎来到天津益元利康生物科技有限公司网站！
022-66387942
一、制备细胞生长培养基
所使用的培养基将取决于所使用的细胞类型。例如:
使用无菌技术在II级安全帽下工作。
二、在显微镜下检查细胞
在生长过程中，应该每天检查细胞，以确保它们健康并按预期生长。它们应该主要附着在烧瓶的底部，形状圆而丰满或细长，并在其膜周围折射光线。这表明他们是健康的。
介质应该是粉橙色。如果细胞大量分离和/或看起来干瘪和颗粒状/颜色深，则丢弃细胞，不要用于检测。
三、制备细胞悬浮液
1. 所有细胞处理和培养基制备应在II类安全柜中使用无菌技术进行。
2. 当细胞融合70-80%时，它们仍应处于生长的对数阶段，可用于电镀。
3. 首先将培养基在37°C水浴中加热至少30分钟。
4. 准备好后，小心地从一个175平方厘米的培养皿中倒入所需细胞的培养基（含有实验室消毒剂），注意不要增加任何滴入的污染风险。
5. 立即更换，小心地倒入100毫升预热好的新鲜培养基。
6. 使用细胞刮板，轻轻刮掉烧瓶底部的细胞到培养基中。有些细胞系可能需要胰蛋白酶化。在继续之前，检查烧瓶底部，检查所有的细胞是否脱落。
7. 确保待计数的细胞悬浮液通过轻摇瓶混合均匀。必要时可使用血清学移液管。
8. 在细胞wan全有机会沉淀之前，使用血清学移液管取出约1ml细胞悬液，并将其放置在附注管中。
9. 用血细胞计进行细胞计数。
四、获得正确的细胞密度
使用下面的计算得到正确的细胞密度。这应该是4.5 × 105个细胞/mL左右，但需要根据细胞系进行优化。
N = df
45 × 104
N是每毫升细胞数
DF是计算出来的稀释系数
由于细胞在100ml培养基中，接下来的计算是：
100 mL x稀释因子
这将给出细胞应该在的介质体积的值。
用血清学移液管加入适量的预热培养基。
例子:
如果细胞计数为55 × 104/mL，有100 mL细胞悬液：
55 × 104细胞/mL = 1.22
45 × 104细胞/mL
100毫升× 1.22 = 122毫升
因此，对于45 × 104/mL的细胞悬浮液，在100 mL细胞悬浮液中加入22 mL预热培养基。
如果正确细胞密度所需的体积小于100ml：
将细胞倒入50ml离心管中。
在离心机中以100转/分旋转10分钟，确保离心机平衡。
小心地倒出上清。
将细胞颗粒重悬于所需体积的预热培养基中。
Abcam抗体代理——天津益元利康生物科技有限公司，提供abcam产品，如抗体、试剂盒、多肽等，更多abcam品牌产品，欢迎咨询！
Abcam 致力于鉴别、开发和提供高质量的生物试剂和工具，这些试剂和工具在药物发现、诊断和基础研究等多个领域和应用中起着至关重要的作用。
Abcam产品主要范围：一抗、二抗、ELISA 和配对抗体对、基因敲除细胞系和裂解液、多重检测激动剂、拮抗剂、活化剂和抑制剂、蛋白等。
Abcam抗体特色产品列表：
产品名称 | 产品简介 |
RabMAb®，兔单克隆抗体 | Abcam致力于为您提供最you质的抗体。Abcam的 RabMAb® 兔单抗 结合了单抗的特异性，为兔免疫系统提供了出色的抗原识别能力。 Abcam的大多数兔单抗采用 重组技术生产，批间一致性高、证实的特异性，可保证长期供应。 为了提高灵活性，Abcam采用新的配方，配置了 10,000 多种无载体蛋白，或不含 BSA 和叠氮化物的抗体 和 抗体对，这些抗体和抗体对可以随时偶联，非常适合用于简单的抗体标记或夹心法检测开发。 |
Alexa Fluor® 偶联一抗 | 蛋白质很少孤立地发挥作用。相反，它们通常在多亚基化合物中发挥作用。因此，要想了解蛋白质的功能，准确掌握治疗进展，必须在多组分状态下靶向蛋白质。 如果没有合适的工具，蛋白质分析将会极其困难，并且得出错误的结果。如果同时使用一抗和二抗（间接检测），会出现物种间交叉反应；寻找适当标记的偶联一抗也可能存在挑战（直接检测）。为了克服这些问题，Abcam独jia推出了一系列带有多种不同荧光标记的偶联抗体产品。 |
上一篇：凯杰rna提取试剂盒说明书
扫一扫，关注微信
孙经理
咨询电话