密理博PVDF膜一文Get

前言：WB实验中的转膜，顾名思义，是将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体上，同时维持其相对位置和分辨率的过程。需要根据杂方案和被转移蛋白的特性.以及蛋白分子量大小等条件去选择合适材质、孔径的杂交膜。

一、膜材质的选择

Western Blot实验中zui常用的转印膜有两种：PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）和NC膜（硝酸纤维素膜）。

1. NC膜

NC膜背景很低，可结合蛋白质和核酸进行各种印迹应用。可适用于蛋白质印迹法、RNA印迹法、DNA印迹法和斑点杂交技术。但缺点是对于分子量较小的蛋白质会在洗涤时丢失，且NC膜韧性较差，操作时容易碎，对操作的技巧要求较高；

2. PVDF膜

PVDF膜在机械强度和化学相容性上都具有更good的性能，且灵敏度高、分辨率和蛋白亲和力较其他的膜要高，非常适合分子量较小的蛋白质检测，通常需要甲醇/乙醇预先活化。现在有新出的免甲醇润湿的PVDF膜，可以免去甲醇对实验操作人员的伤害。

3.根据膜材质的特性选择转印膜，涉及以下几方面的考虑：

蛋白结合能力

是否需要用醇预湿

开展多次剥离（stripping）和再次检测（reprobing）实验的能力

蛋白观察

长期印迹保存

信噪比

可以看出常规PVDF膜相对NC膜优点更多，实用性广。

PVDF膜可提供更好的蛋白截留率、物理强度和广泛的化学兼容性。其中更高的机械强度和出色的耐化学性使PVDF膜成为免疫检测中各种染色应用和多次检测的理想选择。使用PVDF膜的另一个优点是，从单块凝胶上转移的平行重复泳道可用于后续各种应用，如考马斯亮蓝染色，接着切割条带进行N端测序，蛋白水解/肽段分离/内部测序，以及免疫检测。

二、选择膜孔径

选到合适材质的膜之后，还需要根据检测蛋白的大小，选择合适的膜孔径。Western Blot转印膜通常有两种孔径大小：0.2μm和0.45μm。

推荐产品：

1. Immobilon®-P 0.45umzui chang用的WB转印膜，适用于一般的免疫印

迹应用。（货号：IPVH00010）

0.45μm：更加常用，适合大于20kD的蛋白，背景较低

2.Immobilon®-PSQ 0.2um小分子蛋白/肽WB转印膜（货号：ISEQ00010）

适用于蛋白测序和低分子量蛋白的免疫印迹。它有着更高的蛋白结合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。0.2μm ：特别适合小于20kD的蛋白；推荐用于低丰度蛋白检测。结合能力是由孔的内部表面积来决定的（文献参考：Mansfield，1994）。0.2μm转印膜的内部表面积大约是0.45μm转印膜的三倍，使其吸附能力更高

三、选择合适的转印膜形式

• 卷膜

• 预切膜

预切好的膜与所有预制胶以及大部分市售的凝胶电泳系统兼容。

对于用量较小的情况，优先推荐选择预裁切的包装产品，使用比较便捷也可以避免浪费。对于用量较大的情况，推荐使用整卷产品。预裁切产品无需再进行裁切，使用非常便捷；并且由于机械化裁切的效率很高，可以避免手工裁切导致的膜裁切时的浪费。

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