细胞转染的影响因素

　　细胞转染的影响因素
 

　　做转染实验时，除了选择合适的转染试剂，还需要对转染条件进行优化，以便获得转染效果。那么你知道影响细胞转染的因素有哪些吗？让我们一起来看看吧！
 

　　一、细胞状态
 

　　细胞状态不好，会导致转染效率低下，因此，转染前要求良好的细胞状态和细胞活性。转染时细胞密度以70~90%(贴壁细胞)或2×106~4×106细胞/mL(悬浮细胞)为宜，一般不建议用生长几天或传代次数少的细胞做转染，细胞密度过高会严重影响细胞状态(周期进程阻滞，凋亡增加等)，细胞密度过低可能会导致生长异常或者由于转染试剂对细胞的毒性导致细胞死亡。
 

　　二、质粒
 

　　为实现高效率、低毒性的转染，应使用高质量的质粒，结构完整，纯度高，无污染，无菌，无内毒素。如果质粒不纯，带少量盐离子，蛋白、代谢物污染等都会显著影响转染复合物的有效形成；而含有内毒素的质粒对细胞存在很大的毒性作用。另外抗生素一般对真核细胞无毒，但转染过程中细胞通透性增加，使抗生素进入细胞，从而降低细胞活性，导致转染效率低下。
 

　　三、载体构建
 

　　若质粒基因产物对细胞有毒害作用，则转染难以成功。转染载体的构建选择可调控，强度适合的启动子很重要，可以用空载体或相同载体的其他基因作为对照排除毒性对细胞的影响。
 

　　四、转染试剂和DNA的比例
 

　　许多转染方法都需要优化转染试剂和DNA的比例。不同细胞系转染效率通常不同，细胞系的选择通常根据实验需要确定，转染试剂也应根据实验要求和细胞特性选择合适的，然后进行预实验，选择合适浓度的DNA，调整DNA与转染试剂的比例，以获得较高的转染效率。
 

　　五、转染后筛选时间
 

　　转染后筛选不能太早或太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷大，增殖较慢，太晚可能会被没有外源基因转入的细胞淹没，导致筛选不出阳性克隆。因此一般是在转染48h之后开始加抗生素筛选。
 

　　六、污染
 

　　细胞污染会造成转染效率低下，为防止细胞污染应注意避免培养物被细菌、真菌、病毒、支原体或其他细胞种类等污染；避免培养的细胞被支原体污染，必要时进行支原体污染的常规筛查；避免与实验室同时培养的其他种类细胞发生交叉污染。
 

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