一、WB原理WB（WesternBlot，蛋白质印迹法）实验的基本原理在于抗原与抗体之间的特异性结合特征，从而实现对特定蛋白质的检测。作为分子生物学领域中最为常用的实验之一，WB涉及诸多技巧与知识，然而想要获得令人满意的WB检测结果并非易事。二、WB实验步骤三、电泳后如何转膜？1.准备转膜装置：依次放入海绵、滤纸、凝胶、PVDF膜或NC膜、滤纸、海绵，注意各层之间不能有气泡。2.转膜：恒流200-300mA转膜1-2小时（根据蛋白分子量和膜的类型调整）。注：转膜的方法WB实验...

从事细胞培养工作时都有可能面临细胞受到污染的境况。对于细胞的受污染问题，最为紧要的在于防范，因为一旦细胞受到污染，欲挽回已十分艰难，即便成功挽回，细胞的状态亦会受损，进而对实验结果造成影响。怎么解决细胞被污染的问题？把细胞污染分为早期污染和晚期污染两种情况。早期污染是细胞状态变差，但依旧能保持生长，显微镜下未见明显微生物或可见少量微生物。这种情况的话我们在换液时可以多用PBS洗几次，然后加入适合的抗生素。早期污染只要发现及时，处理得当，救回来的可能性还是很大的。晚期污染则是细...

一、buffer是干什么的？PCRbuffer（缓冲液）的作用就是给Taq酶提供一个最适的反应条件。一般含有Tris－HCL，Mgcl2+等成分。不同的pcrbuffer成分可能不一样。二、buffer基本组分1、Tris-HCl：具有良好的缓冲能力和对多种酶的兼容性，在PCR中的主要作用是调节反应体系的pH值，使PCR反应过程维持在一个稳定的ph范围内；为酶反应提供恒定的酸碱环境，保持酶的活性，确保PCR扩增的顺利进行。2、K+：主要发挥稳定酶活性和参与模板DNA的解链作用...

一、扩增方式扩增方式一般有两种，对称扩增和不对称扩增。1、对称扩增使用等量的引物进行PCR扩增，扩增产物量随着PCR循环呈指数增长，一般的PCR，使用的都是这种方式。由于TaqDNA聚合酶具有5’-3’外切酶活性，在PCR扩增的过程中会水解探针，导致探针被耗尽，无法用于熔曲分析；若使用抗酶切修饰的探针，可一定程度降低水解，但由于探针阻碍了聚合酶通过，扩增效率会大幅下降。对称扩增产生的互补双链，会与探针竞争结合靶序列，不利于探针结合到靶序列上，熔曲分析可能会出现异常。优点：灵敏...

一、病毒滴度病毒的滴度：单位体积(通常为mL)液体中具有生物活性的病毒颗粒数。滴度是一个病毒自身复制的数量概念，可分为物理滴度和感染滴度。物理滴度是指包含病毒基因组的病毒颗粒的浓度，可以通过通过定量PCR对病毒颗粒的基因组拷贝数进行检测，也可以通过测定病毒颗粒中的特定蛋白进行定量，但物理滴度未考虑到病毒活性和感染效率，因此是不准确的。感染滴度是指成功转导细胞的病毒颗粒的浓度，须通过细胞感染实验来测定，如利用定量PCR对细胞中的病毒基因拷贝数进行检测，或通过携带荧光的病毒感染细...